Conformité du système AQUIOS STEM aux recommandations internationales de numération clinique des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques CD34+
Dr Andreas Böhmler
L'analyse des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques CD34+ est l'un des tests les plus réglementés dans le domaine de la cytométrie en flux clinique, car la numération d'évènements rares tels que les cellules souches peut représenter un défi en matière de comparabilité et de concordance inter et intralaboratoires.
Cette fiche produit résume les composants essentiels et les caractéristiques techniques de la numération de cellules CD34+ spécifiés dans quatre recueils de normes et recommandations internationales fréquemment utilisés. Elle décrit également la façon dont le système AQUIOS STEM de numération de cellules CD34+ prend en compte ces normes, qui visent à aider les laboratoires dans leurs procédures d'homologation.
Normes et recommandations
Face à l'utilisation croissante de cellules souches périphériques et progénitrices (PBSC) mobilisées dans le cadre de transplantations, Sutherland et al., en association avec l'International Society for Hematotherapy and Graft Engineering (ISHAGE), rédigent en 1996 un ensemble de normes applicables à la numération de cellules CD34+ avec l'intention de proposer une méthode simple qui permettrait un fort taux de précision et de reproductibilité interlaboratoire. Le résultat, à savoir les « recommandations de l'ISHAGE », devient rapidement le texte de référence en matière de numération des cellules progénitrices hématopoïétiques CD34+ par cytométrie en flux1.
En 1998, Keeney et al. publient une version modifiée des recommandations de 1996 qui inclut l'utilisation de billes pour la numération absolue, du 7-AAD en tant que marqueur de viabilité pour exclure les cellules mortes et d'un réactif de lyse ne contenant aucun fixateur2. Ces modifications ont transformé le protocole de base en une méthode àsimple plateforme et les « recommandations de l'ISHAGE concernant la simple plateforme avec marqueur de viabilité » qui en ont résulté n'ont été que légèrement modifiées depuis leur rédaction il y a plus de 20 ans. De nombreuses instances dirigeantes internationales, nationales et régionales ont adapté les composantes essentielles et les caractéristiques techniques du protocole de l'ISHAGE à la numération de cellules CD34+. On peut notamment citer la Pharmacopée européenne (Ph. Eur.), ouvrage de référence unique pour le contrôle qualité des médicaments dans l'Union européenne3. À la différence des recommandations de l'ISHAGE, les normes décrites dans la Pharmacopée européenne sont juridiquement contraignantes, comme le prévoient la Convention relative à l'élaboration d'une Pharmacopée européenne du Conseil de l'Europe et la législation pharmaceutique en vigueur au niveau national et dans l'UE.
Les normes qui régissent la transplantation de cellules progénitrices hématopoïétiques sont publiées par la FACT (Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy) et le JACIE (Joint Accreditation Committee of ISCT and EBMT), la société européenne de transplantation de moelle4. En outre, les normes NetCord-FACT donnent des recommandations en matière d'utilisation des cellules progénitrices hématopoïétiques issues du sang du cordon ombilical5.
Système AQUIOS STEM
Le système AQUIOS STEM comprend le logiciel AQUIOS STEM pour le cytomètre en flux AQUIOS CL, les réactifs du kit AQUIOS STEM, les cellules de contrôle AQUIOS STEM CD34 et les fluorosphères Flow-Check (tableau 1). Il s'agit d'un dispositif médical de diagnostic in vitro conçu pour être utilisé par les professionnels de laboratoire pour la détection des paramètres des types d'échantillons présentés dans le tableau 2 indiquant les paramètres du système automatisé de cytométrie en flux AQUIOS CL.
Cette analyse quantitative est adaptée à l'identification et à la numération des populations cellulaires notées dans le tableau 2 chez les patients se préparant à une greffe autologue ou allogénique de cellules progénitrices hématopoïétiques et chez les donneurs qui font l'objet d'une procédure de mobilisation ou de collecte en vue d'une greffe autologue ou allogénique de cellules progénitrices hématopoïétiques. Les types d'échantillons et les anticoagulants pris en charge par le système sont détaillés dans le tableau 2.
Tableau 1 Composants du système AQUIOS STEM. Tous les composants sont destinés au diagnostic in vitro conformément aux réglementations des pays où les produits sont commercialisés.
| Instrument | Description |
|---|---|
| Cytomètre en flux AQUIOS CL | Cytomètre en flux AQUIOS CL avec gestionnaire d'alimentation sans interruption |
| Software | |
| Logiciel AQUIOS STEM | Logiciel de numération des cellules CD34+ avec algorithmes de caractérisation automatisée pour l'AQUIOS CL. Le module de contrôle qualité du logiciel AQUIOS STEM permet l'accès à eIQAP, le programme électronique d'assurance qualité interlaboratoire de Beckman Coulter, qui permet aux utilisateurs d'obtenir des rapports de comparaison entre groupes de pairs à intégrer aux données de contrôle qualité de leur laboratoire. |
| Réactifs | |
| AQUIOS STEM Kit, 50 tests | Les réactifs du kit AQUIOS STEM comprennent un réactif d'anticorps monoclonaux murins CD45-FITC/CD34-PE, un contrôle négatif correspondant (CD45-FITC/CD34-CTRL), un réactif de numération absolue (fluorosphères AQUIOS STEM-Count), un réactif de viabilité cellulaire (7-AAD) et un réactif de lyse prêt à l'emploi (solution de lyse AQUIOS STEM). |
| Cellules de contrôle AQUIOS STEM CD34, deux niveaux de 15 tests chacun | Les cellules de contrôle AQUIOS STEM CD34 sont des préparations liquides de leucocytes humains stabilisés destinées à la vérification des paramètres CD34 et CD45 sur le système AQUIOS STEM. Chaque kit contient deux niveaux de cellules CD34 comprenant approximativement 10 cellules CD34+/µL pour le niveau 1 et 30 cellules CD34+/µL pour le niveau 2. |
| Fluorosphères Flow-Check, 3 x 10 mL | Les fluorosphères Flow-Check sont des suspensions dosées de fluorosphères (microsphères fluorescentes) utilisées pour la vérification quotidienne de l'alignement optique et du système fluidique du cytomètre en flux. |
Tableau 2 Paramètres du système AQUIOS STEM
| Type d'échantillon | Anticoagulant | Kits/paramètres | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| K2EDTA | K3EDTA | Héparine | Mélange d'héparine et d'ACD-A | ACD-A | CPD | Kit AQUIOS Stem | |
| Sang total (WB) | X | X | X | Pourcentage de CD34 Numération absolue de CD34 Numération absolue de CD45 |
|||
| Sang total mobilisé (MB) | X | X | X | ||||
| Moelle osseuse fraîche ou décongelée (BM) | X | X | X | X | |||
| Produit d'aphérèse frais ou décongelé (AP) | X | X | |||||
| Sang de cordon ombilical frais ou décongelé (CB) | X | X | |||||
Cette fiche produit résume les exigences spécifiées dans les documents d'orientation mentionnés précédemment en matière de numération de cellules CD34+ ; elle décrit également la façon dont le système AQUIOS STEM prend en compte les normes en vigueur qui ont pour but d'aider les laboratoires dans leurs procédures d'homologation. Les catégories et les exigences exposées dans ce document ne sont pas exhaustives, mais mettent l'accent sur les aspects techniques de la procédure de numération des cellules CD34+ ; les autres aspects couverts par les normes et recommandations, tels que les exigences générales en matière de laboratoires, d'installations et de management de la qualité, ne sont pas présentés.
Normes et recommandations internationales régissant l'analyse de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques CD34+
- Recommandations de l'ISHAGE
- Pharmacopée européenne (Ph. Eur.)
- Normes internationales FACT-JACIE relatives à la collecte, au traitement et à l'administration de produits de thérapie cellulaire hématopoïétique
- Normes internationales NetCord-FACT relatives à la collecte, au stockage et à l'administration de sang issu du cordon ombilical
Afin d'assurer la conformité de votre organisation aux normes de soins qui lui sont applicables, consultez l'intégralité des documents référencés dans cette fiche produit ainsi que les lois et réglementations locales, nationales et internationales applicables dans votre région.
Références
- Sutherland DR, Anderson L, Keeney M, Nayar R, Chin-Yee I: The ISHAGE guidelines for CD34+ cell determination by flow cytometry. International Society of Hematotherapy and Graft Engineering. J Hematother. 1996 Jun;5(3):213-26.
- Keeney M, Chin-Yee I, Weir K, Popma J, Nayar R, Sutherland DR: Single platform flow cytometric absolute CD34+ cell counts based on the ISHAGE guidelines. International Society of Hematotherapy and Graft Engineering. Cytometry. 1998 Apr 15;34(2):61-70.
- EDQM Council of Europe: European Pharmacopoeia (Ph. Eur.). 10th Edition 2019-2022. Website: https://pheur.edqm.eu/home
- Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy (FACT), Joint Accreditation Committee – ISCT and EBMT (JACIE): International standards for hematopoietic cellular therapy product collection, processing, and administration. 8th Edition, Version 8.1, 2021. Website: http://www.factwebsite.org/
- Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy (FACT): NetCord-FACT international standards for cord blood collection, banking, and release for administration. 7th Edition, 2019. Website: http://www.factwebsite.org/
- Whitby A, Whitby L, Fletcher M, Reilly JT, Sutherland DR, Keeney M, Barnett D: ISHAGE protocol: are we doing it correctly? Cytometry B Clin Cytom. 2012 Jan;82B:9-17.
