RNAdvance Blood Performance and Data
Extraction d’ARN à partir de tubes de prélèvement sanguin pour stabilisation de l’ARN
Le kit RNAdvance Blood est un kit de réactif d’extraction de l’acide ribonucléique (ARN) conçu à partir de la technologie d’immobilisation réversible en phase solide (SPRI) à base de billes paramagnétiques. Il permet la purification de l’ARN de haute qualité extrait du sang recueilli grâce aux tubes PAXgene. L’extraction peut être exécutée manuellement dans un format de tube de 2 ml ou un format de 96 puits, ou automatisée dans un format de 96 puits sur une variété de stations de travail de manipulation de liquide Beckman Coulter Biomek. L’ARN total extrait du sang préservé par PAXgene en utilisant le kit RNAdvance Blood est exempt d’ADN génomique détectable (ADNg) et autres inhibiteurs PCR.
- Compatible avec les tests PCR en aval
- Produit de l’ARN de haute qualité
- Suppression efficace d’ADN génomique et d’autres contaminants
Intégrité de l’ARN cohérente parmi les échantillons
Les échantillons provenaient de trois tubes différents prélevés chez le même donneur, le même jour. Tous les échantillons ont été préparés dans les 6 heures suivant le prélèvement sanguin et le sang a été conservé sur de la glace ou à 4 °C avant l’extraction de l’ARN. Les scores RIN étaient de 9,4 en moyenne avec un écart-type de 0,4 pour les 9 échantillons préparés. Les scores RIN ont été évalués à l’aide d’un Bioanalyzer 6000 RNA Nano Assay (Agilent).
RNAdvance Blood isole l’ARN à un rendement plus élevé par rapport aux autres fournisseurs
À la Figure 3 (ci-dessous, des échantillons ont été quantifiés en utilisant le NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Le kit RNAdvance Blood a isolé deux fois plus d’ARN que les kits des fournisseurs B et C. Dans la Figure 4 (ci-dessous), la pureté des échantillons a été évaluée à l’aide du NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Les barres d’erreur représentent l’écart-type de trois redosages techniques. L’ARN isolé de RNAdvance Blood est adapté à une utilisation dans des applications en aval.
RNAdvance fournit des performances cohérentes
Dans la Figure 5 (ci-dessous), l’ARN a été extrait de 6 donneurs de 2 utilisateurs différents dans les 24 heures. Les échantillons ont été quantifiés en utilisant le NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Les deux utilisateurs ont extrait des quantités totales similaires d’ARN. Les barres d’erreur représentent l’écart-type de trois redosages techniques.
RNAdvance élimine les inhibiteurs de l’ADN et de la PCR pour une utilisation dans les applications en aval
La capacité de la PCR a été évaluée par qRT-PCR en utilisant un jeu de solutions d’amorçage (amorçage suivant 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ et amorçage inverse 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´) conçues pour englober les gènes Exon 4 et 5 du gène bêta (β)-actine (ActB) pour produire des amplicons de 327 paires de bases. Dans la Figure 6 (ci-dessous), le témoin sans RT démontre également l’élimination de l’ADN qui peut interférer avec les applications d’ARN en aval. Dans la Figure 7 (ci-dessous), l’ARN isolé à l’aide du kit RNAdvance Blood était amplifiable, ce qui indique que le kit a retiré les inhibiteurs de PCR.
RNAdvance isole des quantités élevées d’ARN de haute qualité à partir de sang prélevé dans des tubes PAXgene pendant 4 jours maximum
L’ARN a été extrait de 6 donneurs pendant 4 jours après le don. Le sang a été prélevé dans des tubes PaxGene ARN et a été conservé à 4 °C. Dans la Figure 8 (ci-dessous), les rendements d’ARN étaient systématiquement de 1 μg d’ARN à partir de 400 μl de sang. Il y a eu plus de variance de donneur au jour 2 - jour 4 d’extraction qu’au jour 1. Dans la Figure 9 (ci-dessous), la pureté n’a pas changé de manière significative au cours des 4 jours et était acceptable pour les applications en aval. Les barres d’erreur représentent l’écart-type de trois redosages techniques.
Processus analytique visuel
- Lyse du sang prélevé dans des tubes PAXgene dans le tampon de lyse et la protéinase K
- Lier l’ARN à des billes magnétiques
- Séparer les billes magnétiques des contaminants
- Nettoyer les billes magnétiques avec du tampon de lavage et de l’éthanol à 70 % pour éliminer les contaminants
- Traiter les échantillons avec la DNase I
- Lier de nouveau l’ARN aux billes magnétiques avec du tampon de liaison 2
- Nettoyer les billes magnétiques avec de l’éthanol à 70 % pour éliminer les contaminants
- Éluer l’ARN à partir des billes magnétiques
- Transférer vers une nouvelle plaque
Extraire l’ARN des échantillons en moins de temps avec moins d’actions de pipetage par rapport aux utilisateurs de kits basés sur des colonnes
La Figure 10 (ci-dessus) représente la durée totale d’extraction de l’ARN pour 1 à 96 échantillons en utilisant RNAdvance Blood ou un fournisseur basé sur une colonne. Même à 15 échantillons, le temps total d’extraction de l’ARN du sang est plus rapide avec RNAdvance Blood. Dans la Figure 11 (ci-dessus), le nombre total d’actions de pipette, qui comprennent la distribution d’un échantillon, le mélange d’un échantillon et le rejet des embouts, est requis pour 1, 8, 24, 48 et 96 échantillons. Avec la capacité d’utiliser une pipette multicanaux, il y a beaucoup moins d’actions de pipettes qui doivent avoir lieu qu’avec les fournisseurs basés sur des colonnes.
À utiliser dans les méthodes manuelles ou automatisées en fonction de la taille de lot ou du débit global
Estimation du temps de manipulation et du temps total, en heures, nécessaires pour effectuer 8, 24, 48 et 96 extractions d’ARN sur le RNAdvance Blood. Les méthodes peuvent être effectuées manuellement ou de manière automatisée sur une station de travail de manipulation des liquides. Les données représentées dans ce tableau sont basées sur une station de travail Biomek i7 Hybrid Genomics. La différence de temps entre le traitement manuel et automatisé est indiquée (NR = non recommandé).
| RNAdvance Blood | Manuel | Automatisé | ||
|---|---|---|---|---|
| Taille série | 8 | Temps de manipulation | 1,00 | 0,25 |
| Temps total | 1,50 | 2,50 | ||
| 24 | Temps de manipulation | 1,50 | 0,25 | |
| Temps total | 2,00 | 2,50 | ||
| 48 | Temps de manipulation | NR | 0,25 | |
| Temps total | NR | 2,50 | ||
| 96 | Temps de manipulation | NR | 0,25 | |
| Temps total | NR | 3,00 | ||
Produits RNAdvance Blood d’extraction de l’ARN à partir du sang
RNAdvance Blood est disponible en trois tailles de kit en fonction de vos besoins en termes de débit. Cliquez sur le numéro de pièce spécifique ci-dessous pour acheter ou demander un devis. Pour plus d’informations, consultez notre page sur l’isolation de l’ARN à partir du sang avec RNAdvance.
| N° DE PIÈCE | NOM | PRÉPARATIONS |
|---|---|---|
| A35603 | Kit RNAdvance Blood | 50 |
| A35605 | Kit RNAdvance Blood | 96 |
| A35604 | Kit RNAdvance Blood | 384 |
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